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    昆蟲elisa檢測試劑盒樣品處理及使用怎么做?

    發布時間:2021-06-17   點擊次數:643次
      昆蟲elisa檢測試劑盒樣品收集、處理及保存方法:
     
      1)血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
     
      2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
     
      3)細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
     
      4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
     
      5)保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
     
      用昆蟲elisa檢測試劑盒進行實驗操作時需注意以下事項:
     
      1.標準品的稀釋與加樣
     
      2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
     
      3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
     
      4.配液:將30(48t的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48t的20倍)倍稀釋后備用。
     
      5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
     
      6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
     
      7.溫育:操作同3。
     
      8.洗滌:操作同5。
     
      9.顯色:每孔先加入顯色劑a50μl,再加入顯色劑b50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
     
      10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
     
      11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(od值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
     
      昆蟲elisa檢測試劑盒操作步驟:
     
      1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
     
      2、設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
     
      3、樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
     
      4、除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
     
      5、棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
     
      6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
     
      7、每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
     
      結果判斷
     
      繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
     
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