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    犬elisa檢測試劑盒對檢測標準以及操作流程有什么要求?

    發布時間:2021-04-09   點擊次數:553次
      犬elisa檢測試劑盒是采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被犬免疫球蛋白E(IgE)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的犬免疫球蛋白E(IgE)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
     
      犬elisa檢測試劑盒操作流程:
     
      1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
     
      2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
     
      3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
     
      4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
     
      5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
     
      6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
     
      7.每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
     
      犬elisa檢測試劑盒注意事項:
     
      1、試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
     
      2、各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
     
      3、請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
     
      4、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
     
      5、底物請避光保存。
     
      6、嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
     
      7、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
     
      8、本試劑不同批號組分不得混用。
     
      9、如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
     
      犬elisa檢測試劑盒標本要求:
     
      1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
     
      2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
     
      3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
     
      4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
     
      5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
     
      6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
     
      7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
     
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