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    MMP-11 ELISA檢測試劑盒操作原理及性能

    發布時間:2018-04-27   點擊次數:1376次

    MMP-11 ELISA檢測試劑盒操作原理及性能

     

    人基質金屬蛋白酶11(MMP-11)ELISA試劑盒實驗目的

    本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中人基質金屬蛋白酶11(MMP-11)的含量。

    有效期:6個月

    保存條件:2-8℃

     

     

     

    實驗原理

    試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人基質金屬蛋白酶11(MMP-11)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人基質金屬蛋白酶11(MMP-11)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

     

     

     

    人基質金屬蛋白酶11(MMP-11)ELISA試劑盒組成

    試劑盒組成96孔配置48孔配置備注
    微孔酶標板8孔×12條8孔×6條 無
    標準品0.3mL×6管0.3mL×6管
    樣本稀釋液6mL3mL
    檢測抗體-HRP10mL5mL
    20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋
    底物A6mL3mL
    底物B6mL3mL
    終止液6mL3mL
    封板膜2張2張
    說明書1份1份
    自封袋1個1個

    備注:

    1. 標準品濃度依次為:240、120、60、30、15、0 ng/mL

    2. 經過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

     

     

     

    樣本處理及要求

    1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    3. 細胞培養物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

     

     

     

    需要而未提供的試劑和器材

    1. 酶標儀(450nm)

    2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

    3. 37℃恒溫箱

    4. 蒸餾水或去離子水

     

     

     

    試劑準備

    試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

    20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

     

     

     

    操作步驟

    1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

    2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

    3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

    4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

    5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

    6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

    7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

     

     

     

    注意事項

    1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

    2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

    3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

    4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。

    5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

    6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

    7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

    8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

    9. 不能使用過期產品。

    10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

     

     

     

    洗板方法

    手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。根據需要,重復此過程數次。

    自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

     

     

     

    實驗結果計算

    以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

    Elisa試劑盒標準曲線圖

    (此圖僅供參考)

     

     

     

    人基質金屬蛋白酶11(MMP-11)ELISA試劑盒性能

    1. 檢測范圍:7.5 ng/mL – 240 ng/mL。

    2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 ng/mL。

    3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

    4. 重復性:板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% 。

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