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    大鼠去甲腎上腺素(NE)酶聯免疫分析(ELISA) 試劑盒使用說明書

    發布時間:2022-07-26   點擊次數:122次

    大鼠去甲腎上腺素(NE)酶聯免疫分析(ELISA) 試劑盒使用說明書

    本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中去甲腎上腺素(NE)的含量。

    包裝.jpg.jpg

     

    實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本大鼠去甲腎上腺素(NE)水平。用純化的大鼠去甲腎上腺素(NE)捕獲抗體包被微孔板,制成固相體,往包被的微孔中依次加入大鼠去甲腎上腺素(NE),再與HRP標記的檢測抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠去甲腎上腺素(NE)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品大鼠去甲腎上腺素(NE)含量。

     

    試劑盒組成

    試劑盒組成

    48孔配置

    96孔配置

    保存

    說明書

    1份

    1份


    封板膜

    2片

    2片


    密封袋

    1個

    1個


    酶標包被板

    1×48

    1×96

    2-8℃保存

    標準品

    0.3ml×6管

    0.3ml×6管

    2-8℃保存

    酶標試劑

    5 ml×1瓶

    10 ml×1瓶

    2-8℃保存

    樣品稀釋液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    顯色劑A液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    顯色劑B液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    終止液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    20×濃縮洗滌液

    15ml×1瓶

    25ml×1瓶

    2-8℃保存

    注:標準品濃度依次為:8、4、2、1、0.5、0 ng/mL.

     

    樣本處理及要求

    1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

    2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

    3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

    4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

    5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

    6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融.

    7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

     

    操作步驟

    1. 標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。

    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3. 加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外。

    4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

    5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

    6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

    7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 

    8. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    9. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

     

    注意事項:

    1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。樣本在使用前也要在室溫平衡60分鐘。

    2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

    3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

    4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6. 底物請避光保存。

    7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

    8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9. 本試劑不同批號組分不得混用。


     

    試劑盒性能:

    1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。

    2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于10%和15% 。

     

    檢測范圍:                                              

    0.25 ng/mL - 8 ng/mL

     

    靈敏度:                                              

    檢測濃度小于0.1 ng/mL

     

    保存條件及有效期:

    1.試劑盒保存: 2-8。

    2.有效期: 6個月


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