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    鴨elisa檢測試劑盒的技術流程主要分6步

    發布時間:2022-07-25   點擊次數:80次
      鴨elisa檢測試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中待測物質水平。用純化的待測物質抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入待測物質,再與HRP標記的待測物質抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中待測物質濃度。
     
      鴨elisa檢測試劑盒的計算:
      以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
     
      鴨elisa檢測試劑盒的技術流程:
      1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次。
      2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。
      3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體0.05ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
      4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
      5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
      6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
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