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    在使用豬ELISA檢測試劑盒前要提前做好哪些工作?

    發布時間:2022-06-27   點擊次數:112次
      豬ELISA檢測試劑盒的關鍵技術參數包括板內差異、板間差異、批間差異、重復性、特異性、散布反應、回收率等。如果經常進行ELISA檢測,建議使用同一個試劑盒。制造商,以盡可能保證數據的可重復性(當然,條件是測試條件的一致性)。至于用于科研的ELISA試劑盒,不同廠家使用的抗體對、酶和底物、生產技術和開發實力不同,不同廠家的試劑盒測得的數據也會不同。
     
      實驗前的準備工作:
      1、準備好所有實驗額外所需物品,如試管 吸頭 移液器 離心機等。
      2、確定試劑盒在有效期內。
      3、仔細閱讀說明書。
      4、按說明書確定所有試劑齊全(數量 體積)。
      5、標本制備要規范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。
      6、根據檢測標本數量確定所需試劑的量。
      7、按說明書將所用試劑盒平衡至室溫,配制所需試劑。
     
      豬ELISA試劑盒的樣本處理及要求:
      1、血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
      2、血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
      3、組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
      4、細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
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