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    小鼠β-聯蛋白(β-Catenin)ELISA試劑盒檢測原理

    發布時間:2022-04-13   點擊次數:282次

    小鼠β-聯蛋白(β-Catenin)ELISA試劑盒檢測原理

     

    實驗原理:                                     

    將目標抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的目標連接于固相載體上的抗體結合,然后加入微生物化的目標抗體,將未結合的生物素抗體洗凈后,加入HRP標記和親和素,再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。


    試劑盒操作步驟:

     

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    實驗所需自備試驗器材:

    1. 酶標儀(450nm

    2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

    3. 37℃恒溫箱

    4. 蒸餾水或去離子水

     

    實驗結果計算:

     

    繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

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    技術小提示:

    1. 當混合或重溶蛋白溶液時,盡量避免起沫。

    2. 為了避免交叉感染,配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽。

    3. 每次孵育時,請正確使用封板膠可保證結果的準確性。

    4. 混合后的顯色底物在上板前應為無色,請避光保存;假如微孔板后,將由物色變成不同深度的藍色。

     

    5. 終止液上板順序應同顯色底物上板順序一致;加入終止液后,孔內顏色由藍變黃;若孔內有綠色,則表明孔內液體未混勻;請充分混合。

     

    產品有效期:6個月


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