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    植物ELISA檢測試劑盒在樣本處理上有什么要求?

    發布時間:2020-01-22   點擊次數:876次

      植物ELISA檢測試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被植物可溶性蛋白質(sprotein)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物可溶性蛋白質(sprotein)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。

      樣本處理及要求:
      1、血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
      2、血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2-8°C1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
      3、細胞培養物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
      注:標本溶血會影響后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

      植物ELISA檢測試劑盒的性能:
      1、檢測范圍:2.5μg/mL–80μg/mL。
      2、靈敏度:低檢測濃度小于0.1μg/mL。
      3、特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
      4、重復性:板內變異系數小于10%,板間變異系數小于15%。

      操作步驟:
      1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
      2、設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
      3、樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
      4、除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
      5、棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
      6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
      7、每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

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