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    植物elisa試劑盒檢測的操作流程及注意事項說明

    發布時間:2019-10-18   點擊次數:964次
       植物elisa試劑盒檢測將純化的人白細胞介素抗體涂于微孔板上,制成固相抗體。將白細胞介素依次加入包被單克隆抗體的微孔中,與HRP標記的白細胞介素抗體結合形成抗體-抗原-酶標記的抗體復合物。在徹底清洗后,將基板TMB添加到顏色中。在使用之前,應在室溫下將工具箱從冷藏環境中取出15-30分鐘。如果打開后酶標板沒有用完,應將酶標板存放在密封袋中。在使用之前,應在室溫下將工具箱從冷藏環境中取出15-30分鐘。如果打開后酶標板沒有用完,應將酶標板存放在密封袋中。
     
      植物elisa試劑盒檢測的操作流程如下:
      1、待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
      2、酶標板置4℃,包被過夜。
      3、洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
      4、陰性對照孔每孔加入PBS50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
      5、酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
      6、洗板,同(4)。
      7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液100μl。
      8、酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
      9、洗板,同(4)。
      10、每孔加TMB顯色液100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
      11、每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應。
      12、分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
      13、數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
     
      植物elisa試劑盒檢測的操作注意事項:
      1、試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
      2、實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
      3、不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
      4、使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
      5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品
      6、洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
      7、底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
      8、加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
      9、按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
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