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    大鼠ELISA檢測試劑盒固體樣本處理原則操作流程

    發布時間:2018-06-25   點擊次數:1292次
       大鼠ELISA檢測試劑盒固體樣本處理原則操作流程
      
      大鼠ELISA檢測試劑盒固體樣本處理原則:稱取1g的固體樣本,用9g的緩沖液溶解,蛋白可以直接離心取上清檢測,細胞內的蛋白,要先收集細胞,再用破碎,離心取上清。
      
      1、組織標本:切割標本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存中如有沉淀形成,應再次離心。對于植物組織,不好勻漿的話,就在液氮中充分研磨;
      
      2、大鼠ELISA檢測試劑盒細胞內蛋白樣本
      
      許多待測蛋白不是蛋白,而是存在于細胞內的蛋白,這個時候,要先收集細胞,洗滌干凈,再破碎細胞,離心取上清。
      
      大鼠ELISA檢測試劑盒操作流程如下:
      
     ?。?)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
      
     ?。?)酶標板置4℃,包被過夜。
      
     ?。?)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
      
     ?。?)陰性對照孔每孔加入PBS50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
      
     ?。?)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
      
     ?。?)洗板,同(4)。
      
     ?。?)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液100μl。
      
     ?。?)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
      
     ?。?)洗板,同(4)。
      
     ?。?0)每孔加TMB顯色液100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
      
     ?。?1)每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應。
      
     ?。?2)分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
      
     ?。?3)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
      
      
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